基因突变影响视紫红质转录表达和NRL蛋白稳定性的细胞学研究

作者：赵娜; 吕雅素; 陆勤康^*; 王红婷; 王惠云; 童奇湖; 张咸宁

来源：中华眼视光学与视觉科学杂志, 2017, 19(01): 47-52.

• 视锥-视杆细胞同源异形框基因
• 神经视网膜亮氨酸拉链
• 2型视锥-视杆细胞营养不良
• 遗传性视网膜变性
• 双荧光素酶实验
• 蛋白质印迹法

目的在细胞水平上,探讨存在和缺乏神经视网膜亮氨酸拉链(NRL)的条件下,视锥-视杆细胞同源异形框基因(CRX)突变型对调控视紫红质基因转录表达的影响,并分析CRX突变型对CRX和NRL蛋白稳定性的影响。方法实验研究。分别构建携带野生型和c.C766T(p.Gln256X)无义突变型的CRX基因,以及共表达NRL基因和牛视紫红质基因启动子萤光素酶(pBR130-luc)的表达载体,分别转染体外培养的293T细胞和ARPE-19细胞,再行双荧光素酶检测分析和Western blotting实验。以持家蛋白GAPDH作为内参照。结果与野生型CRX蛋白的表达导致牛视紫红质启动子表达5倍的激活率相比,CRX/c.C766T(p.Q256X)突变所造成的相应激活率降至1/4。共表达野生型CRX和NRL基因后,激活率增高至30倍,而共转染CRX/c.C766T和NRL后,牛视紫红质蛋白的活性降至1/13。以持家蛋白GAPDH作为内参,可见存在CRX/c.C766T突变时,CRX蛋白的稳态水平大幅下降,且CRX/c.C766T突变型对NRL蛋白的稳态有一定的影响,出现NRL增高的现象。结论在细胞水平上,CRX基因的c.C766T(p.Q256X)突变可降低所调控的视紫红质蛋白的表达,并对CRX蛋白和NRL蛋白的稳态均造成一定的影响。

• 单位
  宁波大学; 浙江大学; 宁波市鄞州人民医院