结核病阳性血清特异结合蛋白的筛选与鉴定

作者：易小妹; 王丽; 罗丹; 王忠刚; 李玲玲; 廖雅婷; 曾焱华^*

来源：生物技术, 2019, 29(03): 240-244.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.03.0042

• T7噬菌体
• 结核分枝杆菌
• 基因组DNA文库
• 优势抗原

[目的]从T7噬菌体展示的结核分枝杆菌基因组DNA文库中筛选结核病阳性血清特异结合蛋白。[方法]以饱和硫酸铵法初步纯化的结核病阳性血清为靶分子,对结核分枝杆菌基因组DNA文库进行3轮生物淘选; PCR扩增阳性噬菌体的外源DNA片段,测序后进行BLAST分析;间接ELISA和斑点免疫印迹试验检测阳性噬菌体与结核病阳性血清能否特异结合。[结果]经过3轮生物淘选,与结核病阳性血清特异结合的噬菌体得到明显富集; BLAST结果表明随机挑取的19个阳性噬菌体包括4种不同的序列,其中编码核糖激酶的序列出现次数最多;这些代表性噬菌体均能与结核病阳性血清特异结合。[结论]成功筛选到能与结核病阳性血清特异结合的4种蛋白,其中核糖激酶可能为与结核病阳性血清特异结合的优势抗原。

• 单位
  南华大学附属第一医院; 南华大学