CREB激活促进神经痛大鼠脊髓背角HCN4转录的实验研究

作者：王蓉; 万琪; 谢晔; 徐陶; 曾俊伟; 刘晓红^*

来源：遵义医科大学学报, 2023, 46(01): 7-13.

DOI：10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2023.0003

• 脊髓背角
• 环磷腺苷效应元件结合蛋白
• 疼痛
• 超极化激活环核苷酸门控的阳离子通道4
• 电泳迁移率实验

目的 探讨CREB激活促进神经痛大鼠脊髓背角HCN4转录的信号机制。方法 雄性成年SD大鼠随机分为6组：Sham组，Sham+Vehicle组，CCI+Vehicle组，CCI+H-89(PKA抑制剂),CCI+KN-93(CaMKⅡ抑制剂),CCI+Naphthol AS-E(CREB抑制剂)。各组大鼠在CCI术后分别注射0.005%DMSO、H-89、KN-93或Naphthol AS-E,在CCI术前，术后1、3、5、7 d检测各组大鼠给药1 h后的机械刺激缩足反射阈值(MWT);实时荧光定量PCR检测HCN4 mRNA表达；Western blot检测脊髓(L4～L6)背角HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB表达；EMSA检测CREB与HCN4启动子的DNA结合活性。结果 与Sham组相比，CCI+Vehicle组在1、3、5、7 d的MWT显著降低(P<0.05),脊髓背角HCN4 mRNA表达明显上调(P<0.05),HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB蛋白表达明显上调(P<0.05);与CCI+Vehicle组相比，H-89、KN-93或Naphthol AS-E抑制剂组MWT显著上调(P<0.05),HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB蛋白表达显著下降(P<0.05),HCN4 mRNA表达显著减少(P<0.05);与Sham组相比，CCI+Vehicle组背角CREB与HCN4启动子的DNA结合活性升高，但H-89、KN-93或Naphthol AS-E处理后CREB与HCN4启动子的DNA结合活性减弱。结论 神经痛大鼠脊髓背角PKA和CaMKII激活，导致转录因子CREB与HCN4基因启动子结合，促进HCN4转录和蛋白表达。

• 单位
  遵义医科大学