益气解毒方通过诱导自噬促进鼻咽癌细胞凋亡的作用研究

作者：蔺婷; 罗晶婧; 周芳亮; 范婧莹; 戴娜; 胡梅; 何迎春^*

来源：中药新药与临床药理, 2019, 30(10): 1149-1158.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2019.10.001

• 益气解毒方
• 自噬
• 凋亡
• 鼻咽癌
• CNE-2Z细胞

目的研究益气解毒方(Qi-boosting toxin-resolving Formula,QBTRF)对人鼻咽癌CNE-2Z细胞自噬和凋亡的影响,探讨CNE-2Z细胞自噬和凋亡之间的关系。方法 CCK-8法检测不同浓度益气解毒方干预鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h和48 h后的细胞存活率,并计算48 h的IC50;采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术Western Blot和透射电镜等方法检测QBTRF干预鼻咽癌CNE-2Z细胞后的自噬和凋亡情况。结果 CCK-8法结果显示,QBTRF能显著抑制CNE-2Z细胞增殖(P<0.01),48 h的IC50为0.5 mg·mL-1;AnnexinV-FITC/PI结果显示,与Control组比较,QBTRF干预不同时间后细胞凋亡率明显升高(P<0.01),与QBTRF组比较,3-MA(自噬抑制剂)+QBTRF组的细胞凋亡率显著下降(P<0.01)。MDC染色法结果显示,与Control组比较,0.5 mg·mL-1QBTRF处理CNE-2Z细胞不同时间后荧光增强增加(P<0.05,P<0.01),干预24 h时,荧光强度最大(P<0.01)。Western Blot结果显示,与Control组比较,QBTRF干预CNE-2Z细胞不同时间后cleaved Caspase-3、Bax、cleaved PARP、LC3-II、Beclin1蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01),Bcl-2、PI3K、p-AKT和p-mTOR的蛋白表达量下降(P<0.01),AKT蛋白表达无变化(P> 0.05);与0.5 mg·mL-1QBTRF组比较,3-MA+QBTRF组cleaved Caspase-3、cleaved PARP、Bax的蛋白表达量下降(P<0.01),Bcl-2、PI3K、p-AKT、和p-mTOR的蛋白表达量上调(P<0.05,P<0.01),AKT蛋白表达无变化(P> 0.05),Z-VAD-fmk(凋亡抑制剂)+QBTRF组的LC3-II和Beclin1蛋白表达量下调(P<0.05)。透射电镜结果显示,QBTRF干预CNE-2Z细胞不同时间后细胞内自噬体和凋亡小体出现不同程度增加,24 h自噬最为显著,48 h凋亡最为明显。结论 QBTRF可抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖并诱导细胞凋亡和自噬;QBTRF可能通过诱导自噬促进鼻咽癌细胞凋亡。

• 单位
  湖南中医药大学