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摘要
目的通过对膝骨关节炎(KOA)Kellgren-Lawrence分级(K-L分级)的各阶段的血清样本进行同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)蛋白组学分析,查找正常组与KOA组的血清差异蛋白。方法收集符合美国风湿病学院诊断标准KOA患者60例,再参照K-L分级标准,分为K-L 0、Ⅱ、Ⅳ级3个亚组进行对比,每个亚组单纯随机抽样选取10例男性与10例女性。去除血清高丰度蛋白,进行稳定同位素116、117、118的i TRAQ标记、反相色谱柱分离、质谱检测,采用Swissport数据库检索蛋白峰图,并行生物信息学分析。采用Western blot技术对代表性血清差异蛋白行表达验证。并采用Image J软件计算条带的曝光值,分析差异蛋白组间差异。结果通过对不同样品的i TRAQ肽段实验标记、Q-star质谱鉴定和Mascot蛋白搜索软件搜库,共筛选出有意义差异蛋白169个。通过K-L 0级组与K-LⅡ级、Ⅳ级组对比,共筛选出有意义差异蛋白89个,其中上调的差异蛋白有75个,下调的差异蛋白有14个。通过Western blot验证结果显示,与正常对照组相比,脂联素蛋白在KOA患者血清中表达量上调(F=10.06,P<0.05),C反应蛋白表达下调(F=6.26,P<0.05)。结论本实验通过i TRAQ定量蛋白组学分析和Western blot验证发现脂联素蛋白在KOA患者的血清中的上调表达。脂联素蛋白可能是KOA发生发展过程中的生物标志物,为KOA发生发展机制及血清标志物的研究提供了新的线索。
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单位广西医科大学第九附属医院; 广西医科大学第一附属医院
