抑制凋亡相关基因PNAS-2表达后U937细胞凋亡率的改变

作者：王海嵘; 顾春红; 钟璐; 钟济华; 韩洁英; 陈芳源; 欧阳仁荣

来源：诊断学理论与实践, 2007, 6(05): 422-426.

DOI：10.3969/j.issn.1671-2870.2007.05.007

• PNAS-2
• 细胞凋亡
• 短发夹RNA PNAS-2
• Cell apoptosis
• Short hairpin RNA

目的:构建并鉴定凋亡相关基因——PNAS-2的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体,将其转染U937细胞,筛选后检测细胞凋亡的变化。方法:shRNA质粒载体pRNAT U6.1/NEO经限制性内切酶BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,连接带有BamHⅠ及HindⅢ黏性末端的shRNA插入片段,转化感受态细菌,并行测序鉴定。将阳性shRNA质粒载体进行细胞转染,合并使用G418及流式细胞仪(FCM)筛选出GFP阳性细胞,应用半定量PCR鉴定shRNA封闭效果;用Annexin V-APC/7-AAD标记后,使用FCM及激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡。结果:测序鉴定证实,PNAS-2特异的shRNA质...

• 单位
  上海交通大学医学院附属仁济医院