竞争抑制酶联免疫吸附法快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素P

作者：崔梦含; 李响响; 赵燕英; 刘骥; 朱成林; 陈娟; 唐俊妮^*

来源：食品安全质量检测学报, 2021, 12(20): 8265-8272.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2021.20.050

• 单克隆抗体
• 酶联免疫吸附法
• 金黄色葡萄球菌
• 金黄色葡萄球菌肠毒素P

目的建立竞争抑制酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素P (staphylococcal enterotoxin P, SEP)的分析方法。方法根据ELISA的检测程序,利用交叉方阵滴定法确定SEP抗原的最佳包被浓度及单克隆抗体的最佳倍比稀释浓度,再对辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG (HRP-IgG)最佳稀释浓度及最佳反应时间进行筛选,然后通过测定450 nm处不同SEP抗原包被条件(包被液类型、包被环境)、封闭液类型及浓度、封闭时间、竞争反应温度、反应方式(预混反应、直接反应)下的OD值对检测条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标样品回收率对方法进行评价。结果 SEP抗原最佳包被浓度为2.500μg/mL,鼠单抗血清稀释度1:6000 (V:V),酶标抗稀释度1:3000 (V:V);反应1 h,最佳包被条件为磷酸盐缓冲液4℃过夜,10%脱脂乳封闭2h,37℃直接竞争反应。此方法的线性回归方程为:Y=0.4166X-0.7415 (r2=0.9908),灵敏度为0.954μg/mL,批内及批间变异系数均低于3%,对人工污染的脱脂牛奶、LB (Luria-Bertani)液体培养基中肠毒素蛋白SEP的回收率高于98%。结论该方法具有较好的回收率和稳定性,可应用于肠毒素蛋白SEP的快速检测。

• 单位
  西南民族大学