人转录因子PU.1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

作者：刘晨阳; 颜文杰; 王敏; 孙文逵; 苏欣; 施毅

来源：医学研究生学报, 2016, (05): 465-469.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2016.05.004

• PU.1
• SPI1
• 重组腺病毒
• 烟曲霉
• 天然免疫 PU.1
• SPI1
• Recombinant adenovirus
• Aspergillus fumigatus
• Innate immunity

目的 PU.1是调控肺泡巨噬细胞天然免疫功能的重要转录因子之一。文中旨在构建并鉴定表达人转录因子PU.1基因的重组腺病毒载体。方法将PU.1基因SPI1和真核表达载体p IRES-EGFP进行双酶切、连接酶连接,PCR扩增目的片段SPI1-IRES-EGFP,与中间质粒p DONR221和腺病毒骨架质粒p Ad/CMV/V5-DEST进行重组,线性化后转染人胚肾293(HEK293)细胞,获得重组腺病毒p AD-SPI1-IRES-EGFP,经过大量扩增后获得高浓度的重组腺病毒。TCID 50法测定重组腺病毒滴度,通过荧光显微镜和实时荧光定量PCR(Real-time q PCR)鉴定PU.1...

• 单位
  上海市第一人民医院; 中国人民解放军东部战区总医院; 南方医科大学