E3泛素连接酶RNF185对A亚群禽白血病病毒体外复制的影响

作者：刘晶; 陈雪阳; 曾扬; 杨玉莹^*

来源：中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4364-4371.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.11.027

• 环指蛋白185(RNF185)
• A亚群禽白血病病毒(ALV-A)
• 病毒复制

【目的】环指蛋白185(ring finger protein 185,RNF185)是Ring家族E3泛素连接酶的一员。试验旨在探明鸡源RNF185对A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A,ALV-A)体外复制的影响，为进一步研究鸡源RNF185对ALV-A致病性的影响和介导的致瘤机制提供参考。【方法】参考GenBank中已公布的鸡RNF185基因(登录号：NP＿001007841)序列分别设计RNF185过表达引物和RNF185单链shRNA,通过PCR扩增RNF185基因及合成双链shRNA,将其分别克隆至真核表达载体psi-flag和干扰载体pLKO.1-GFP,并使用PCR、双酶切和测序等方法验证重组质粒。使用Western blotting验证重组质粒的表达和干扰效果，并使用CCK-8试剂盒检测重组质粒对DF-1细胞活性的影响。在RNF185过表达和干扰后的DF-1细胞中分别接种104半数组织感染剂量(TCID50)ALV-A(rHB2015012)病毒液，于接种完成后3、4和5 d收取细胞，并使用Western blotting检测ALV-A的病毒载量。【结果】PCR成功扩增出RNF185基因，单链shRNA经退火后形成双链shRNA,并成功构建重组质粒psi-flag-RNF185、pLKO.1-RNF185-1和pLKO.1-RNF185-2。Western blotting结果表明，构建的过表达和干扰质粒能够在DF-1细胞中稳定表达和干扰RNF185。CCK-8结果表明，过表达和干扰RNF185不影响DF-1细胞的活性。RNF185过表达可以促进ALV-A在DF-1细胞中的复制，干扰RNF185表达可以抑制ALV-A在DF-1细胞中的复制。【结论】本研究构建了可以在DF-1细胞中高效表达和干扰RNF185的过表达质粒和干扰质粒，RNF185对DF-1细胞增殖无明显影响，能够促进ALV-A(rHB2015012)在体外的复制。

• 单位
  动物科学学院; 长江大学