新型二合一PiggyBac转座系统的构建及功能验证

作者：张尧仓; 彭玉; 丁可昕; 台福敏; 郑晓飞; 秦宜德^*; 付汉江^*

来源：中国生物工程杂志, 2022, 42(06): 39-46.

DOI：10.13523/j.cb.2203005

• PiggyBac转座子
• 稳定转染
• EGFP

目的：PiggyBac(PB)转座子是一种可移动的遗传元件，采用“剪切和粘贴”机制在载体和染色体之间进行转座；通过将转座子元件和转座酶表达框整合到一个表达载体中，构建简便易用的二合一PB转座系统。方法：通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)获取PiggyBac转座系统所需转座子元件和转座酶表达框，利用T4 DNA连接酶将转座酶表达框插入到pUC18载体上，再利用Gibson同源重组技术将转座子元件与重组载体结合构建二合一PB转座系统；使用该系统携带的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)以及功能性损伤抑制蛋白(damage-suppressing protein, DSUP)检测其有效性及可靠性。结果：在所有筛选获得的嘌呤霉素抗性细胞中，EGFP都是明亮可见；利用此二合一PB转座系统成功获得了可高效表达功能性损伤抑制蛋白的稳定细胞系，证明外源基因可被有效整合到基因组DNA中并表达。结论：成功构建了新型二合一PB转座系统，使稳定表达细胞系的建立更加经济简便。

• 单位
  安徽医科大学; 基础医学院