基于Cre-LoxP系统的线粒体钙离子单向转运体脑条件性敲除小鼠模型的构建及鉴定

作者：高俊; 温开清; 朱海珍; 周涛; 李爱玲; 李腾; 张学敏; 潘欣^*

来源：军事医学, 2022, 46(07): 518-523.

• Cre-LoxP系统
• 线粒体钙离子单向转运体
• 基因敲除
• 脑
• 小鼠
• 胚胎干细胞
• 聚合酶链反应

目的 应用Cre-LoxP系统构建线粒体钙离子单向转运体(MCU)脑条件性敲除小鼠。方法 采用胚胎干细胞(ES细胞)打靶技术，将两个LoxP位点转入MCU基因5号外显子两端，构建MCUflox/+小鼠。经与Nestin-cre工具小鼠交配获得MCU脑条件性敲除小鼠(MCUflox/flox:Nestin-cre+)。采用鼠尾PCR进行基因型鉴定，Western印迹和实时荧光定量PCR(qPCR)技术分别从蛋白质和mRNA水平检测MCU的敲除效果。统计分析敲除小鼠生长发育和繁殖情况，旷场实验评价敲除小鼠自发活动性和适应性，高架O迷宫评价敲除小鼠焦虑情绪。结果 基因型鉴定、Western印迹和qPCR结果显示MCU脑条件性敲除小鼠成功构建，敲除小鼠繁殖能力正常，子代雌雄和基因型比例符合预期。与野生型小鼠相比，MCU脑条件性敲除小鼠体重明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。敲除小鼠在旷场中运动的总距离和运动时间明显高于野生型小鼠(P<0.05)，在中间区域的停留时间、高架O迷宫开放臂的进入次数和时间无显著性差异。结论 成功构建MCU脑条件性敲除小鼠，小鼠可正常生长繁育，发育略有迟缓，运动和适应能力正常，有高度活跃行为，无明显焦虑样情绪。