细菌16SrRNA基因荧光定量PCR诊断新生儿败血症

作者：吴亦栋; 尚世强; 李建平; 杨祖钦; 郑之北; 杜立中; 赵正言

来源：中华儿科杂志, 2007, 45(06): 446-449.

• 婴儿,新生,疾病
• 败血病
• RNA,核糖体,16S
• 聚合酶链反应

目的探讨新生儿败血症的快速可靠诊断方法,以提高临床检测细菌的速度及准确性。方法以细菌16S rRNA 基因为靶序列,设计通用引物及 TaqMan 探针,建立细菌16S rRNA 基因实时荧光定量 PCR 反应体系;选择临床引起新生儿败血症的常见菌如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大肠埃希菌等进行浓度梯度实验;对临床疑为新生儿败血症的830例感染性疾病的新生儿抽取静脉血分别做细菌16S rRNA 基因荧光定量 PCR 和血培养检测。结果临床常见分离株金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌荧光定量 PCR 检测结果均为阳性;巨细胞病毒、EB 病毒、乙肝病毒,新型隐球菌及白色念珠菌,人基因组 DNA 及空白对照均为阴性。细菌荧光定量 PCR 最低能检测到3个细菌,其荧光定量 CT 值为37.90;对临床疑为感染性疾病的830例患儿标本中,荧光定量 PCR 检测血标本阳性率5.18%(43/830),血培养阳性率2.41%(20/830),前者明显高于后者,差异具有统计学意义,P<0.01,30例非感染性疾病患儿血标本荧光定量 PCR 检测及细菌培养均为阴性。若以血培养作为对照,荧光定量 PCR 方法的诊断敏感性为100%,特异性为97.16%,正确诊断指数为0.972。结论建立了细菌16S rRNA 基因荧光定量 PCR 诊断新生儿败血症方法。其检测快速、简便,为新生儿败血症提供早期、敏感的病原学诊断依据。

• 单位
  中心实验室; 浙江大学医学院附属儿童医院