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摘要
背景:研究发现,淫羊藿苷可促进小鼠前成骨细胞增殖分化。核因子κB信号通路和细胞自噬在成骨细胞分化调节中发挥重要作用,两者是否参与调节淫羊藿苷对小鼠前成骨细胞增殖分化的影响尚不清楚。目的:探讨淫羊藿苷对小鼠前成骨细胞增殖分化的影响以及核因子κB信号通路和细胞自噬在其中的作用。方法:(1)筛选出淫羊藿苷的最佳干预浓度:将小鼠前成骨细胞MC3T3-E1细胞分为空白对照组及不同浓度(0.01,0.1,1,10,100μmol/L)的淫羊藿苷组,MTS检测淫羊藿苷干预后各组小鼠前成骨细胞增殖活性;茜素红染色评估成骨分化水平;Western blot检测淫羊藿苷干预后各组小鼠前成骨细胞成骨分化能力和自噬活性;(2)加入3-甲基腺嘌呤抑制自噬:实验设置4组,对照组、3-甲基腺嘌呤组、淫羊藿苷组、3-甲基腺嘌呤+淫羊藿苷组,茜素红染色观察细胞矿化结节;Western blot检测细胞碱性磷酸酶、Runx2、p62、LC3、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白的表达情况。结果与结论:(1)淫羊藿苷能促进小鼠前成骨细胞增殖,浓度为10μmol/L时效果最明显(P <0.05);10μmol/L淫羊藿苷组矿化结节形成明显多于空白对照组,碱性磷酸酶、Runx2蛋白表达显著增加(P <0.05);与空白对照组相比,10μmol/L淫羊藿苷组Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著增加,p62表达减少(P <0.05);(2)予3-甲基腺嘌呤抑制自噬后,与淫羊藿苷组相比,3-甲基腺嘌呤+淫羊藿苷组碱性磷酸酶、Runx2、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达减少,p62表达增加(P <0.05);(3)与对照组相比,淫羊藿苷组p-p65/p65表达减少(P <0.05);(4)结果提示,淫羊藿苷可能通过抑制核因子κB信号通路和增强自噬促进MC3T3-E1细胞成骨分化。
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