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摘要
东亚西番莲病毒（East Asian Passiflora virus, EAPV）、夜来香花叶病毒（Telosma mosaic virus, TeMV）和黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）是当前危害我国西番莲的主要病毒种类。为建立同时快速检测西番莲上EAPV、TeMV和CMV的可视化多重逆转录环介导等温核酸扩增（Multiplex reverse transcription loop-mediated isothermal amplification, multiplex RT-LAMP）技术，本研究根据GenBank已报道的EAPV、TeMV和CMV外壳蛋白（Coat protein,CP）基因序列保守区域分别设计、筛选特异性引物，并通过反应体系和反应条件的优化，建立了可同时快速检测EAPV、TeMV和CMV的多重RT-LAMP技术，并进行了特异性、灵敏度测定及西番莲果园样品的检测。结果表明，建立的多重RT-LAMP方法特异性良好，可对EAPV、TeMV和CMV同时进行检测，而与西番莲上其他病毒及阴性对照无交叉反应；多重RT-LAMP的灵敏度最低可检测稀释至145×10-3 ng/μL总RNA，与一步法RT-PCR方法的灵敏度相当；西番莲果园样品3种病毒的多重RT-LAMP检测结果与一步法RT-PCR检测结果一致。本研究建立的多重RT-LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高，适用于基层实验室和现场对西番莲上EAPV、TeMV和CMV的快速初筛。
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