摘要
目的观察活性氧(reactive oxygen species, ROS)在去甲斑蝥素(norcantharidin, NCTD)诱导的人宫颈癌HeLa细胞凋亡中发挥的调节作用。方法体外培养HeLa细胞,甲基噻唑蓝比色法(MTT)检测NCTD的细胞毒性,流式细胞分析法检测ROS的产生,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态学变化,免疫蛋白印迹法观察凋亡相关蛋白Procaspase 9、Caspase 3和ICAD的表达水平变化。结果 NCTD能够时间依赖性地诱导细胞ROS产生,NCTD产生的ROS主要以超氧阴离子的形式存在,60μmol/L的NCTD作用于HeLa细胞24 h后可使细胞皱缩、变圆,形成凋亡小体,活化Caspase-9和Caspase-3,并裂解ICAD,诱导细胞凋亡的发生。超氧阴离子的清除剂SOD可显著逆转NCTD诱导细胞生长抑制和细胞凋亡,明显影响NCTD诱导的Caspase-9蛋白的裂解,Caspase-3的剪切和ICAD的降解。结论 NCTD诱导超氧阴离子的产生介导HeLa细胞凋亡。
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