乙肝病毒X蛋白上调肝癌细胞缺氧诱导因子-1α的作用和机制研究

作者：刘利平; 杨盛力; 何婉; 孙枫林; 鲍世韵

来源：中国癌症杂志, 2015, 25(05): 333-338.

DOI：10.3969/j.issn.1007-3969.2015.05.003

• 肝细胞癌
• 缺氧诱导因子-lα
• 乙肝病毒X蛋白
• 希佩尔林道病肿瘤抑制蛋白

背景与目的:乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在肝癌发生、发展过程中起重要作用。有研究显示,两者在肝癌组织中的表达呈正相关,但相关机制尚不明确。本研究拟进一步在细胞水平上探讨HBx对HIF-1α的调控作用及机制。方法:用LipofectemineTM 2000包裹HBx表达质粒转染到肝癌Huh7细胞。蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Huh7细胞中HIF-1α和HIF-1β蛋白的表达;特异性试剂盒检测HIF-1α转录活性;实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测HIF-1α及其靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和多药耐药基因1(multi-drug resistance gene 1,MDR1)m RNA表达变化;免疫共沉淀法检测HIF-1α、HBx和希佩尔林道病肿瘤抑制蛋白(protein von Hippel-Lindau,p VHL)间的相互作用。结果:转染HBx质粒后,Huh7细胞中HIF-1α蛋白表达、转录活性及其靶基因VEGF和MDR1的m RNA表达水平明显上调(P<0.05),然而HBx对HIF-1αm RNA表达水平没有明显影响(P>0.05)。同时,HBx显著削弱p VHL介导的泛素化水解蛋白酶降解HIF-1α的活性。免疫共沉淀法检测进一步提示,HBx可直接结合p VHL,而对HIF-1α没有结合作用。结论:HBx可能通过直接结合p VHL,抑制其与HIF-1α的相互作用,从而增强HIF-1α蛋白的稳定性及转录活性。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属梨园医院; 第二临床医学院; 暨南大学; 深圳市人民医院