过表达和敲降ace-miR-3759-y对中华蜜蜂幼虫靶基因表达及体重的影响

作者：吴鹰; 叶亚萍; 钱加珺; 张佳欣; 顾小雨; 牛庆生; 陈大福^*; 郭睿^*

来源：应用昆虫学报, 2023, 60(01): 87-95.

• 中华蜜蜂
• 幼虫
• 血淋巴
• miRNA
• ace-miR-3759-y
• 过表达
• 敲降

【目的】miRNA在昆虫的生长、发育和代谢等诸多生物学进程中发挥关键调控作用。本研究对ace-miR-3759-y进行表达和序列验证，并通过过表达与敲降ace-miR-3759-y探究其对中华蜜蜂Apis cerana cerana幼虫靶基因表达及重量的影响，以期为ace-miR-3759-y调控幼虫发育的分子机理研究提供依据。【方法】通过Stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证ace-miR-3759-y的表达和序列。通过饲喂模拟物(Mimic)和抑制物(Inhibitor)对中华蜜蜂幼虫血淋巴中的ace-miR-3759-y进行过表达和敲降。利用RT-qPCR检测ace-miR-3759-y的过表达和敲降效果及靶基因相对表达量。利用电子天平对幼虫进行称重。【结果】ace-miR-3759-y在中华蜜蜂幼虫肠道和血淋巴中真实存在和表达。相较于Mimic-NC组，ace-miR-3759-y在Mimic-ace-miR-3759-y组4日龄和5日龄幼虫血淋巴中显著上调（P<0.05），在6日龄幼虫血淋巴中上调表达但组间差异不显著（P>0.05）。相较于Inhibitor-NC组，Inhibitor-ace-miR-3759-y组4、5和6日龄幼虫血淋巴中均显著下调表达（P<0.05）。过表达ace-miR-3759-y后，CIC在4、5和6日龄幼虫血淋巴中的表达量均显著下调（P<0.05）;CKI在4日龄和5日龄幼虫血淋巴中的表达量显著下调（P<0.05），在6日龄幼虫血淋巴中下调表达但组间差异不显著（P>0.05）。敲降ace-miR-3759-y后，CIC在5日龄幼虫血淋巴中显著上调表达（P<0.05），在4日龄和6日龄幼虫血淋巴中上调表达但组间差异不显著（P>0.05）;CKI在4日龄幼虫血淋巴中显著上调表达（P<0.05），在5日龄和6日龄幼虫血淋巴中上调表达但组间差异不显著（P>0.05）。此外，与Mimic-NC组相比，Mimic-miR-3759-y组的6日龄幼虫的体重下降，但组间差异不显著（P>0.05）；与Inhibitor-NC组相比，Inhibitor-miR-3759-y组的6日龄幼虫体重上升，但组间差异不显著（P>0.05）。【结论】通过饲喂Mimic和Inhibitor的方法在中华蜜蜂幼虫血淋巴中实现了ace-miR-3759-y的有效过表达及敲降，ace-miR-3759-y负调控CIC和CKI的表达，ace-miR-3759-y对幼虫体重无显著影响。

• 单位
  吉林省养蜂科学研究所; 动物科学学院; 福建农林大学