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摘要
目的 探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)通过调控Zeste同源物2增强子（EZH2）表达影响肾小管上皮细胞-间充质转化（EMT）过程及DKD肾纤维化发病机制。方法 12只清洁级雄性SD大鼠，随机分为正常对照（NC）组、DKD组，各6只，检测各组BG、BUN和24 h尿白蛋白（24 hUAlb）。培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E），分为正常对照组（Con）、高糖组（HG）和高渗组（HM）。在无血清条件下用脂质体2000(Lip2000)转染法，将空载质粒（Vector）、敲低及过表达SIRT1和EZH2质粒分别转染细胞，将细胞分为正常空载组（Con+Vector）、正常敲低EZH2转染组（Con+sh-EZH2）、正常敲低SIRT1转染组（Con+sh-SIRT1）、正常过表达EZH2转染组（Con+oe-EZH2）、正常过表达SIRT1转染组（Con+oe-SIRT1）、高糖空载组（HG+Vector）、高糖敲低EZH2转染组（HG+sh-EZH2）、高糖敲低SIRT1转染组（HG+sh-SIRT1）、高糖过表达EZH2转染组（HG+oe-EZH2）、高糖过表达SIRT1转染组（HG+oe-SIRT1）、高糖双转过表达组（HG+oe-EZH2+oe-SIRT1）。HE、Masson染色观察肾组织病理形态改变，免疫荧光化学染色观察NRK-52E细胞中SIRT1和EZH2表达，Western blot和qRT-PCR检测肾组织和NRK-52E细胞SIRT1、EZH2、E-cadherin、α-SMA和Collegen Ⅲ蛋白和mRNA表达。结果 DKD组BG、BUN、24 h UAlb高于NC组（P<0.05）,HE、Masson染色观察到DKD组肾小管管腔扩张，肾小球和肾间质有蓝紫色胶原纤维沉积；DKD组较NC组α-SMA、Collagen Ⅲ、EZH2蛋白表达升高（P<0.05）,E-cadherin、SIRT1蛋白表达降低（P<0.05）。培养的细胞中，HG组较Con组α-SMA、Collagen Ⅲ、EZH2蛋白表达升高（P<0.05）,E-cadherin、SIRT1蛋白表达降低（P<0.05）。与HG+Vector组比较，HG+sh-EZH2组E-cadherin蛋白表达升高（P<0.05）,EZH2、α-SMA、Collagen Ⅲ蛋白表达降低（P<0.05）,HG+oe-EZH2组EZH2、α-SMA、Collagen Ⅲ蛋白表达升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达降低（P<0.05）;HG+sh-SIRT1组较HG+Vector组EZH2、α-SMA、Collagen Ⅲ蛋白表达升高（P<0.05）,SIRT1、E-cadherin蛋白表达降低（P<0.05）,HG+oe-SIRT1组SIRT1、E-cadherin蛋白表达升高（P<0.05）,EZH2、α-SMA、Collagen Ⅲ蛋白表达降低（P<0.05）;HG+oe-EZH2+oe-SIRT1组较HG+oe-EZH2组α-SMA、Collagen Ⅲ、EZH2蛋白表达升高（P<0.05）。无论是敲减内源性SIRT1或过表达SIRT1，对EZH2 mRNA表达均无影响。免疫共沉淀研究结果显示，在肾小管上皮细胞中SIRT1蛋白与EZH2蛋白存在体内互作关系。结论 SIRT1可负调控EZH2蛋白表达抑制肾小管上皮细胞EMT过程，抑制DKD肾纤维化以发挥肾脏保护作用。
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