PTD-SARA融合蛋白的表达、纯化及鉴定

作者：宋扬; 张珍; 张英起; 黄晨

来源：中国生物制品学杂志, 2009, (03): 242-245.

DOI：10.13200/j.cjb.2009.03.39.songy.009

• PTD-SARA融合蛋白
• 表达
• 纯化
• 慢性肾病
• 纤维化 PTD-SARA fusion protein
• Expression
• Purification
• Chronic kidney disease
• Fibrosis

目的在大肠杆菌中表达PTD-SARA融合蛋白,并对其进行纯化和鉴定。方法使用大肠杆菌偏爱密码子合成PTD-SARA全长基因,将其克隆入载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA,转化感受态大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定及N-端测序。结果重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA经双酶切及测序鉴定证明构建正确。1.0mmol/LIPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的25%,主要以包涵体形式存在。纯化的融合蛋白纯度为94%,浓度为0.2mg/ml,且具有良好的反应原性,N-端有1...

• 单位
  第四军医大学; 西京医院