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摘要
为进一步明确花椒窄吉丁Agrilus zanthoxylumi气味结合蛋白AzanOBP5在昆虫嗅觉识别过程中的功能，基于花椒窄吉丁转录组数据（SUB6796283）利用cDNA末端快速扩增技术对花椒窄吉丁气味结合蛋白基因AzanOBP5进行全长克隆并进行生物信息学分析；通过实时荧光定量检测技术测定基因AzanOBP5在成虫不同组织中的表达情况。结果显示，克隆获得基因AzanOBP5全长740 bp(GenBank登录号为MT318834),5’端非编码区为172 bp,3’端非编码区114 bp，开放阅读框453 bp，编码150个氨基酸。序列分析表明，AzanOBP5氨基酸序列与苹果小吉丁Agrilus mali AmalOBP5的氨基酸序列一致性最高。成功构建pET-21a-AzanOBP5重组质粒并在大肠杆菌Escherichia coli中表达，经过诱导和纯化条件的优化及Western blot鉴定，得到的融合蛋白His-AzanOBP5大小符合预期。基因AzanOBP5在雌雄成虫的不同组织中均有表达，其中在成虫腹部的表达量最高。表明花椒窄吉丁气味结合蛋白基因AzanOBP5除参与嗅觉识别过程外，还可能具有其他生理功能。
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