新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体的构建

作者：渠志臻; 刘珊; 王艳艳; 高乃康; 呼格吉乐

来源：检验医学与临床, 2014, 11(21): 2958-2962.

• 干扰RNA
• 新靶点
• 细胞周期蛋白E
• 胶质瘤

目的构建4个新靶点的人CyclinE干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质细胞瘤U251细胞,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA表达,获得干扰效果最好的真核表达载体,为CyclinE成为人脑肿瘤标志物提供有价值的资料。方法 (1)构建4个新靶点CyclinE干扰RNA的真核表达载体后,用双酶切和碱基序列测定的方法鉴定载体构建成功与否;(2)用Lipofectamine 2000转染4个成功构建的载体到胶质瘤U251细胞株;(3)通过RT-PCR的结果检测转染后CyclinEmRNA表达量,选出干扰效果最好的1个。结果 (1)成功构建了4个新靶点的CyclinE干扰RNA真核表达载体即PCyclinE-1、PCyclinE-2、PCyclinE-3、PCyclinE-4。(2)CyclinEmRNA表达明显受到抑制,并获得效果最好的CyclinE干扰RNA真核表达载体。结论成功构建并筛选出效果最好的新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体,使U251细胞的CyclinE mRNA表达明显降低。

• 单位
  内蒙古医科大学附属医院