西尼罗河病毒RT-RPA检测方法的建立及初步应用

作者：吴江; 林彦星; 贾鹏; 黄超华; 史卫军; 曹琛福; 曾少灵; 孙洁; 阮周曦; 林永涛; 花群义^*

来源：中国兽医杂志, 2021, 57(02): 35-127.

• 西尼罗河病毒
• 逆转录重组酶聚合酶扩增
• 等温扩增

为建立快速特异的西尼罗河病毒(WNV)检测方法,本研究根据WNV基因保守区域基因序列,采用Primer Explorer Version 4设计特异性的重组酶聚合酶扩增(RPA)引物和探针。经过引物筛选和条件优化,建立了在39℃恒温条件下15 min内即可完成的实时荧光RT-RPA方法。本方法能特异性检测出WNV,且与蓝舌病毒(BTV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核酸检测没有交叉反应。本方法灵敏性强,最小检出量为5.25×102拷贝/μL。采用创建的RT-RPA方法检测72份牛或猪的临床样品,结果与实时荧光定量PCR方法相符。说明本试验创建的WNV RT-RPA方法操作简便、灵敏度和特异性高,适用于WNV监测、基层实验室或出入境口岸对WNV的现场快速检测。

• 单位
  深圳海关动植物检验检疫技术中心