γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因调控的初步研究

作者：程璘令; 李冰; 涂洪斌; 刘启才; 冉丕鑫

来源：现代临床医学生物工程学杂志, 2006, 12(04): 328-332.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2006.04.008

• 慢性阻塞性肺病
• γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶
• 氧化应激
• E-box元件
• 大鼠

目的研究抗氧化基因———大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的功能区及其调控表达。方法克隆1.76 kb大鼠γ-GCS基因的重链亚单位———GCLC基因的上游调控序列,并构建含荧光素酶基因的报道载体GCLC-Luc(GCLC/pGL-3)。利用嵌顿缺失方法构建GCLC基因的缺失体,并将其表达载体转染大鼠肺泡上皮细胞,在细胞中分析该基因的调控区域。通过该方法初步发现GCLC基因的上游调控序列的-745~-705 bp属负性调控区域。利用EMSA和supersh ift证实大鼠肺泡上皮细胞GCLC基因负调控区域的E-box元件能与转录因子USF1/USF2特异性的结合。将USF的真核表达载体和逆转录病毒表达载体分别导入肺泡上皮细胞,观察GCLC基因的转录活性和GCLC蛋白的表达情况。结果GCLC基因的-403~-111 bp和-705~-613 bp区段属正调控区域;-745~-705 bp属负调控区域。EMS和supersh ift证实上游刺激因子(USF)能与该负调控区域的E-box元件结合抑制GCLC基因的转录和表达。结论发现GCLC基因其中2个正调控区域(-403~-111 bp与-705~-613 bp)和1个负调控区域(-745~-705 bp),其中负调控区域-745~-705 bp上的E-box元件通过与USF结合介导GCLC基因的负性表达调控。

• 单位
  广州呼吸疾病研究所; 广州医学院