巨噬细胞迁移抑制因子调节登革病毒2型感染诱导人脐静脉内皮细胞自噬的研究

作者：苟小琴; 吴宁; 左丽^*

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2022, 42(03): 185-193.

• 登革病毒2型
• 巨噬细胞迁移抑制因子
• 自噬
• 腺苷酸激活蛋白激酶
• 原代人脐静脉内皮细胞

目的研究原代人脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)被登革病毒2型(dengue virus type 2, DENV2)感染后, 巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)对腺苷酸激活蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase, AMPK)/细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)自噬信号途径的影响。方法 TCID50检测DENV2对C6/36细胞的毒力, RT-PCR检测DENV2感染后HUVEC内病毒NS1基因部分片段;透射电子显微镜观察自噬体结构, Western blot检测不同剂量病毒感染HUVEC后对微管关联蛋白Ⅱ(microtubule-associated proteins Ⅱ, LC3-Ⅱ)表达的影响和不同时间MIF的蛋白质水平变化, 分析MIF与自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的相关性;MIF抑制剂和通路抑制剂分别预处理DENV2感染的HUVEC, Western blot检测MIF、AMPK、ERK、mTOR和LC3-Ⅱ蛋白变化, 分析MIF与AMPK自噬通路的关联。结果实验用毒株对C6/36细胞的TCID50为10-9.09/ml, 被感染的HUVEC内可检测病毒NS1基因部分片段序列。不同剂量病毒感染后, 在HUVEC内可形成自噬小体或自噬溶酶体, 自噬水平有差异。DENV2感染HUVEC引起MIF和LC3-Ⅱ mRNA水平的变化呈正相关, MIF抑制剂的处理影响通路蛋白AMPK、ERK和LC3-Ⅱ的表达, 但几乎不影响MIF的蛋白质水平。结论 DENV2感染HUVEC引起的MIF变化可影响自噬水平, MIF通过调控AMPK/ERK/mTOR途径影响自噬。

• 单位
  贵州医科大学; 基础医学院