基于基因转染法的胸苷磷酸化酶高表达结肠癌细胞株的建立

作者：王绮雯; 刘剑; 叶钿均; 张继民

来源：广东医学, 2015, 36(01): 30-34.

DOI：10.13820/j.cnki.gdyx.2015.01.060

• 胸苷磷酸化酶
• 基因转染
• 慢病毒
• 结肠癌细胞株

目的构建表达高度胸苷磷酸化酶(TP)活性并可以稳定传代的结肠癌细胞株。方法合成包含TP c DNA全长的真核细胞表达载体,用慢病毒包装后转染人结肠癌细胞株SW480、LOVO、HT29和LS174T,流式细胞仪检测转染效率,实时荧光定量RT-PCR方法检测TP的m RNA表达,蛋白印迹法(Western blot)检测TP蛋白表达。结果转染TP c DNA后,SW480、LOVO、HT29与LS174T在传代5代后转染效率仍稳定在95%左右。与未转染TP基因的亲代细胞相比,SW480-TP、LOVO-TP、HT29-TP与LS174T-TP的TP m RNA的表达分别提高了(694.56±171.53)、(282.46±86.85)、(8.45±0.15)和(2 615.02±253.97)倍,差异有统计学意义(P<0.05);并且TP蛋白的表达水平也显著提高。结论慢病毒载体能够高效地将TP c DNA转染至人结肠癌细胞SW480、LOVO、HT29和LS174T中,所得克隆能够稳定传代,并能显著提高4株结肠癌细胞TP的m RNA和蛋白表达水平。

• 单位
  广州医科大学附属第二医院