青蒿素衍生物DHA/ARTS诱导肾癌细胞系786-0发生铁死亡的机制

作者：黄成丽; 林芳荣; 李根; 王忠玲; 王雪娇^*

来源：西部医学, 2022, 34(02): 178-184.

• 双氢青蒿素
• 青蒿琥酯
• 铁死亡
• NCOA4
• FTH1

目的 探讨双氢青蒿素(DHA)/青蒿琥酯(ARTS)诱导肾癌细胞系786-0发生铁死亡的机制。方法 将DHA/ARTS刺激肾癌细胞系786-0,确定DHA/ARTS所诱导的肾癌细胞死亡即为铁死亡；利用RT-qPCR、Western blot等实验技术，观察NCOA4和FTH1在DHA/ARTS作用后的变化；两种不同siRNA敲减NCOA4后，观察DHA/ARTS对786-0作用的变化；构建pmCherry-EGFP-FTH1质粒和荧光显色，过表达该质粒，观察DHA/ARTS作用后荧光颜色及亮度变化，判断FTH1的自噬降解情况；敲减NCOA4后再转染pmCherry-GFP-FTH1质粒，检测DHA/ARTS作用后荧光颜色及亮度变化，探索NCOA4调节FTH1的自噬降解。结果 786-0细胞系在DHA和ARTS作用后，从显微镜观察和CCK-8检测，显示细胞发生了明显死亡，并且随着药物浓度的增大存活细胞数越少。而且由DHA和ARTS所产生的致死作用可以被铁死亡抑制剂DFO和Fer-1所抑制。DHA和ARTS作用下786-0细胞内ROS的荧光强度明显高于对照组，差异有统计学意义(q=2.894,2.342;P<0.05)。在铁死亡抑制剂DFO和Fer-1干预下，DHA+DFO组、DHA+Fer-1组、ARTS+DFO组、ARTS+Fer-1组786-0细胞内ROS的荧光强度明显低于DHA组和ARTS组(P<0.05)。从自噬结果来看，DHA组和ARTS组的细胞自噬率明显高于对照组(P<0.05),并且50μM的DHA和ARTS组细胞的自噬率明显高于20μM的DHA和ARTS组(P<0.05)。在siRNA-NCOA4沉默NCOA4表达后，细胞自噬率明显降低(P<0.05)。结论 青蒿素衍生物DHA和ARTS可诱导786-0肾癌细胞系发生铁死亡，其致铁死亡的发生是通过NCOA4介导FTH1特异性自噬降解而实现的。

• 单位
  海南医学院第一附属医院