RNAi沉默原代星形胶质细胞IL-17基因表达方法的建立

作者：沈笑然; 朱瑞锋; 郭佳翔; 李凌舟; 郭洪亮^*

来源：中国实验诊断学, 2023, 27(10): 1191-1195.

• 原代星形胶质细胞
• IL-17
• 基因沉默技术
• 转染

目的 通过基因沉默技术构建质粒成功转染原代星形胶质细胞(Ast)抑制IL-17表达，探讨IL-17的功能。方法 在制备原代Ast基础上，应用IL-17基因沉默质粒pGenesil-1A和B,用Lipofectamine 2000转染Ast,通过荧光分析法、RT-PCR法、Western Blotting法观察IL-17基因沉默后效果。结果 携带pGenesil-1B和A的IL-17基因沉默质粒制备成功后，免疫荧光携带pGenesil-1B转染效果明显高于pGenesil-1A,其转染率可高达56.72%;基因沉默组在转染后72 h内任一时间点IL-17 mRNA表达均低于正常对照组和基因沉默对照组(P<0.05),且24 h IL-17表达最低(P<0.05)。蛋白表达上，在IL-17基因沉默后3、5、7 d,其蛋白表达仍持续减低(P<0.05)。结论 应用Lipofectamine 2000可成功将IL-17 RNAi pGenesil-1质粒转染至原代星形胶质细胞。

• 单位
  首都医科大学附属北京朝阳医院; 首都医科大学附属北京安贞医院; 河南科技大学