埃博拉病毒莱斯顿亚型实时荧光定量PCR检测方法的建立Real-time PCR Detection Method for the Reston Subtype of the Ebola Virus

作者：许黎黎; 鲍琳琳; 谷松至; 秦川XULili; BAO Linlin; GU Songzhi; QIN Chuan

来源：病毒学报, 2015, (03): 275-280.

DOI：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.002672

• 埃博拉病毒莱斯顿亚型
• 荧光定量PCR
• 病毒载量Key words: Reston subtype of the Ebola virus
• Real-time PCR
• Viral load

本研究的目的为建立一种灵敏、快速、定量检测埃博拉病毒莱斯顿亚型核酸的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒。首先选择埃博拉病毒莱斯顿亚型的保守基因NP基因作为检测靶目标，筛选出保守序列并设计合成一对特异性引物。然后将连有NP全长基因的重组质粒作为定量标准品，将10倍系列稀释的重组质粒进行荧光定量PCR扩增，绘制标准曲线，并进行重复性、灵敏度及特异性检测。结果显示建立的埃博拉病毒莱斯顿亚型荧光定量PCR检测方法，其灵敏度可达102拷贝/μL，不同梯度标准品间线性关系（R2）达0.997，斜率为-0.3101，扩增效率为110.145%，所有标准品均在79.94℃出现尖且窄的特异性熔解峰。利用该检测系...

• 单位
  国家中医药管理局; 中国医学科学院医学实验动物研究所; 中国医学科学院北京协和医院