5α-羟基木香酸抑制VEGF164诱导大鼠脉络膜血管内皮细胞增殖、迁移及血管形成

作者：雷武龙; 姚浩; 徐欢; 周希瑗^*

来源：陆军军医大学学报, 2023, 45(14): 1501-1508.

DOI：10.16016/j.2097-0927.202212176

• 倍半萜类,桉烷
• 脉络膜新生血管化
• 血管生成素-2
• 血管内皮生长因子A

目的 探讨5α-羟基木香酸(5α-hydroxycostic acid, 5α-HA)体外抑制脉络膜新生血管(choroidal neovascularization, CNV)模型的作用及其机制。方法 体外培养大鼠脉络膜血管内皮细胞(choroidal vascular endothelial cells, CECs)后分为(n=3):空白对照组、模型组[30 ng/mL抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)164]、干预组(30 ng/mL VEGF164+100μmol/L 5α-HA)、抑制剂组[30 ng/mL VEGF164+5μmol/L Semaxanib(VEGFR2特异性阻断剂)]。CCK-8实验检测各组CECs的增殖情况，细胞划痕实验、Transwell实验以及Matrigel基质胶管腔形成实验分别观察各组CECs的增殖、迁移以及管腔形成。RT-qPCR检测各组细胞渗漏相关因子如血管生成素2(Angiopoietin 2,Ang 2)、血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)的mRNA水平的表达；Western blot检测各组细胞信号通路及渗漏相关蛋白P-VEGFR2、P-Tie2、P-FAK、VE-Cadherin、ZO-1、Occudin的表达；免疫荧光检测各组细胞中Ang 2蛋白的表达，统计分析上述各组间的指标差异。结果 CCK-8实验表明：与模型组比较，干预组5α-HA作用于CECs后能抑制CECs的异常增殖(P<0.01)。细胞划痕实验、Transwell实验以及Matrigel基质胶管腔形成实验表明：干预组能扭转模型组VEGF164引起的CECs迁移及管腔形成(P<0.01)。RT-qPCR结果显示：干预组能抑制模型组中Ang 2 mRNA的上调以及VE-Cadherin和ZO-1的下调(P<0.01)。Western blot结果显示：干预组能减少模型组中P-VEGFR2、P-Tie2及P-FAK蛋白的表达(P<0.01),同时上调VE-Cadherin、ZO-1以及Occudin蛋白的表达(P<0.05)。细胞免疫荧光实验结果显示，与模型组比较，干预组能减少模型组中Ang 2蛋白的表达(P<0.01)。结论 5α-HA可能通过抑制VEGFR2、Tie2双途径磷酸化以及抑制VEGFR2/FAK信号通路抑制VEGF164诱导的CECs增殖、迁移以及管腔形成。

• 单位
  重庆医科大学附属第二医院