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摘要
该研究将米曲霉RIB40（Aspergillus oryzae RIB40）来源的谷氨酰胺酶（Gah B）在黑曲霉（Aspergillus niger）宿主中分泌表达。基于该研究所建立表型鉴定板与孔板培养的通量鉴定筛选方法成功得到重组表达谷氨酰胺酶的转化子H-GahB，最高酶活力达到1.35U/m L。为了增加目的基因在宿主中的拷贝数，采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术重新构建高拷贝的谷氨酰胺酶表达菌株C-Gah B，其酶活力提高到3.56 U/mL，约为H-Gah B的2.64倍。进一步采用ARTP诱变技术对C-Gah B进行传统诱变育种，获得了谷氨酰胺酶工程菌株A-Gah B，其酶活力提升到4.16U/m L，比出发菌株C-Gah B的酶活力提高了0.17倍。纯化后的重组Gah B的比酶活达到40.63 U/mg，最适温度为37℃，最适p H值为7.0，其在20～40℃及pH值5.5～8.0之间稳定性较好。K+对Gah B的酶活力具有激活作用，Zn2+和Mn2+则对GahB的酶活力有较为强烈的抑制作用。当盐质量分数为18%时，GahB表现出35.38%的相对酶活力。该研究第一次在黑曲霉中实现了来源于米曲霉RIB40的谷氨酰胺酶GahB的重组分泌表达，为此后对米曲霉谷氨酰胺酶的研究提供了基础。
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