基于TNF功能表位设计新型人源单链抗体

作者：常宏; 吕明; 乔春霞; 李新颖; 耿晶; 周婷婷; 林周; 沈倍奋; 冯健男

来源：中国医药生物技术, 2014, 9(04): 241-249.

• 肿瘤坏死因子α
• 单链抗体
• 计算机辅助设计
• 支架
• 同源模建
• 拮抗肽

目的开发基于TNF功能表位的新型人源单链抗体。方法利用自主研制的鼠抗TNF-α中和单抗Z12能特异性识别TNF-α的141146位功能表位特性,通过理论模拟构建TNF/抗体Z12相互作用的复合物模型设计获得功能性拮抗肽(PT2、PT3、PT4、PT7)以及单域抗体PTVH5(以人抗体可变区重链框架VH5为支架合理展示PT2、PT3、PT4),利用计算机辅助分子设计以及同源模建、分子对接方法,进一步合理选择人抗体可变区轻链框架(Vκ1)作为展示支架,通过构象判别、作用能比较以及识别区域确认并选择合适的连接肽设计新型单链分子ScFvAB1。结果理论分析发现,ScFvAB1稳定性较好,识别TNF-α的141146功能位点(即Z12识别的位点)。生物学实验证明,ScFvAB1能与TNF-α结合、抑制TNF-α与TNFR的结合、抑制TNF-α介导的细胞毒作用。结论初步验证了"借助计算机模建,基于人抗体可变区的框架结构和拮抗肽设计单链抗体分子"的策略是可行的,从而为人源小分子抗体的制备提供了一条可供选择的途径。

• 单位
  军事医学科学院基础医学研究所; 基础医学院; 河北中医学院