HLH缺失型Id2候选相互作用蛋白

作者：伍志强; 孟元光; 赵亚力; 杨洁; 田丽媛; 司艺玲; 韩为东

来源：军事医学科学院院刊, 2007, (04): 317-321.

• Id2
• 螺旋-环-螺旋构型
• 酵母菌
• 双杂交系统技术
• 蛋白相互作用

目的:筛选可以与螺旋-环-螺旋(HLH)结构域缺失的Id2相互作用的蛋白。方法:用重叠延伸PCR方法将Id2中的HLH结构域缺失,并插入到pGBKT7载体,构建BD:Id2-DBM-δHLH融合诱饵质粒;构建MCF-7细胞的dscDNA文库;采用共转化方法进行1d2-DBM-δHLH相互作用蛋白的酵母双杂交筛选,采用PCR方法扩增阳性克隆中的AD:cDNA序列并测序;将获得的AD:cDNA质粒分别与BD:Id2-DBM-δHLH诱饵质粒共转化酵母进行配对验证。结果:酵母双杂交方法共筛选到19个阳性克隆,PCR方法在这19个克隆中共扩增到28条片段,序列测定证实含18个不同的基因,对其中的13个进行配对验证后证实了其中8个与HLH缺失型Id2相互作用,这8个基因分别是:UXT、VIM、KRT7、FHL2、SEI1、PCBP1、SIVA和LSM2。结论:本研究首次利用HLH缺失型Id2作为诱饵,利用酵母双杂交技术筛选识别了一族新的Id2相互作用蛋白,为进一步研究Id2的功能调控以及非HI.H依赖的功能活性奠定基础。

• 单位
  解放军总医院