向日葵黑茎病菌TaqMan-MGB探针实时荧光快速检测方法

作者：段维军^*; 段丽君; 吕燕; 陈倩; 吴品珊; 蔡磊

来源：植物病理学报, 2021, 51(06): 975-986.

DOI：10.13926/j.cnki.apps.000734

• 向日葵黑茎病菌
• 实时荧光PCR
• TaqMan-MGB探针
• 检测

向日葵黑茎病菌是我国进境检疫性有害生物名录中的一种检疫性真菌。根据向日葵黑茎病菌及其近似种的ITS序列差异,设计并合成特异性引物和探针,建立了向日葵黑茎病菌的实时荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明,该检测方法能特异性检测向日葵黑茎病菌;灵敏度试验结果表明,最低检测限量为20μL反应体系中总DNA含量0.1 pg;实时荧光PCR优化反应条件为引物终浓度0.6μmol·L-1,探针终浓度0.3μmol·L-1。实际样品检测结果表明,该方法可用于疑似携带向日葵黑茎病菌样品的检测与初筛。此方法快速、灵敏,整个反应过程约1 h,检测过程完全闭管,无需PCR后续处理,为早期快速检测向日葵黑茎病菌提供了重要参考。

• 单位
  宁波检验检疫科学技术研究院; 中国检验检疫科学研究院; 中国科学院微生物研究所