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摘要
目的构建含糖尿病相关锚定重复序列蛋白(DARP)基因的重组腺病毒过表达及RNA干扰载体。方法应用PCR技术扩增大鼠DARP基因序列,设计并合成shRNA序列,分别插入表达载体GV-314和GV-119,经基因测序鉴定。用重组DARP过表达和shRNA表达穿梭载体与辅助包装质粒pBHGloxΔE1共转染人胚肾细胞HEK293,进行病毒包装、出毒和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度。用重组腺病毒感染大鼠H9c2细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western Blot检测DARP蛋白表达。结果基因测序显示DARP过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符,转染HEK293细胞包装成功。DARP过表达和shRNA腺病毒明显影响H9c2细胞中DARP蛋白表达水平。结论成功构建了大鼠DARP过表达及特异性shRNA腺病毒表达载体。
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单位广东医科大学附属医院; 广东医科大学
