微小RNA-146a靶向沉默三磷酸腺苷结合盒转运体A1调控THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出

作者：幸世峰^*; 孙理华; 骆小梅

来源：实用心脑肺血管病杂志, 2021, 29(05): 63-69.

• 动脉粥样硬化
• 三磷酸腺苷结合盒转运体A1
• 微小RNA-146a
• NF-κB

背景抑制巨噬细胞脂质蓄积(泡沫化)和炎症因子释放是防治动脉粥样硬化(AS)的重要途径。微小RNA(miR)-146a是否通过三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)等膜蛋白以三磷酸腺苷(ATP)为能源将细胞内游离胆固醇转运到细胞膜表面,进而减少细胞内胆固醇蓄积尚未知。目的探讨微小RNA(miR)-146a是否通过靶向沉默ABCA1调控THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出。方法本次实验时间为2018年12月—2020年6月。培养THP-1细胞(人单核细胞株)并经佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞,其吞噬脂质形成巨噬细胞源性泡沫细胞。将巨噬细胞源性泡沫细胞分为空白对照组,培养液中不加任何其他试剂;阳性对照组,培养液中加入肝X受体激动剂T0901317;阴性对照组,培养液中加入ABCA1小干扰RNA(siRNA);模拟物组,培养液中加入miR-146a mimics;抑制剂组,培养液中加入miR-146a inhibits;采用液体闪烁计数法检测胆固醇流出效率。将巨噬细胞源性泡沫细胞分别接种到6孔板并培养至生长对数期,按照要求分别加入In-NC(NC组)、miR-146a mimics(模拟物组)、miR-146a inhibits(抑制剂组)、miR-146a mimics+核因子κB(NF-κB)抑制剂(模拟物+PDTC组)、miR-146 anhibits+NF-κB抑制剂(抑制剂+PDTC组),分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blotting法检测NF-κB通路p50、p65及ABCA1的m RNA、蛋白相对表达量。将巨噬细胞源性泡沫细胞接种于培养瓶内,汇合度达到80%后分别转染miR-146a mimics(模拟物组)、miR-146a inhibits(抑制剂组)及In-NC(NC组),采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测正常细胞、坏死细胞及凋亡细胞水平。采用荧光素酶报告基因检测miR-146a与ABCA1结合情况。结果阳性对照组胆固醇流出效率高于空白对照组,阴性对照组和模拟物组胆固醇流出效率低于阳性对照组,抑制剂组胆固醇流出效率高于空白对照组、阴性对照组和模拟物组(P <0.05)。模拟物组正常细胞水平低于NC组,抑制剂组正常细胞水平高于NC组和模拟物组(P <0.05);模拟物组坏死细胞、晚期凋亡细胞、早期凋亡细胞水平高于NC组,抑制剂组坏死细胞、晚期凋亡细胞、早期凋亡细胞水平低于NC组和模拟物组(P <0.05)。模拟物组NF-κB通路p50、p65的mRNA、蛋白相对表达量高于NC组,ABCA1的mRNA、蛋白相对表达量低于NC组(P <0.05);模拟物+PDTC组NF-κB通路p50、p65的mRNA、蛋白相对表达量低于模拟物组,ABCA1的m RNA、蛋白相对表达量高于模拟物组(P <0.05)。抑制剂组NF-κB通路p50、p65的m RNA、蛋白相对表达量低于NC组,ABCA1的m RNA、蛋白相对表达量高于NC组(P <0.05);抑制剂+PDTC组NF-κB通路p50、p65的m RNA、蛋白相对表达量高于抑制剂组,ABCA1的m RNA、蛋白相对表达量低于抑制剂组(P <0.05)。SDM2+miR-146a组和SDM1/SMD2+miR-146a组ABCA1 3’UTR活性与WT+Con-miR组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-146a可通过抑制ABCA1表达而抑制巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出,从而导致AS发生发展,而NF-κB可以减轻miR-146a对ABCA1表达的抑制作用。

• 单位
  新疆医科大学第五附属医院