墨兰B类PI基因多靶点CRISPR/Cas9载体构建

作者：吴林鲜; 兰晓天; 朱永平; 胡淞; 田英男; 冯磊; 刘修远; 万希文; 何静; 和凤美^*

来源：分子植物育种, 2018, 16(21): 7027-7031.

DOI：10.13271/j.mpb.016.007027

• CRISPR/Cas9
• 墨兰
• MADS-box
• PI
• 基因功能

MADS基因家族对植物成花具有重要作用,在兰花中,目前还没有利用CRISPR/Cas9进行基因编辑的相关报道。墨兰(Cymbidium sinense) B类PISTILLATA (PI)基因可能与墨兰舌瓣的形成有关,为了进一步验证其PI基因的功能,本研究利用在线软件CRISPR-P设计3个靶点,并采用Overlapping-PCR技术和Golden Gate cloning策略构建了墨兰PI基因CRISPR/Cas9的多重sg RNA载体系统,经PCR、酶切和测序验证,植物编辑载体已构建成功。为在墨兰中实现该基因的定向突变提供了理论依据,同时也为在兰花基因组中应用CRISPR/Cas9基因编辑技术进行基因的定点突变修饰提供参考。

• 单位
  云南农业大学