人大肠癌和癌旁组织消减cDNA文库的构建和鉴定

作者：叶方鹏; 肖冰; 南清振; 吴保平; 崔生达; 张万岱

来源：胃肠病学, 2004, (03): 154-157.

• 结肠直肠肿瘤
• 抑制消减杂交
• 基因文库
• DNA,互补

背景:抑制消减杂交(SSH)是一种较成熟的分离差异表达基因的方法,但用该方法构建大肠癌特异性基因消减cDNA文库和筛选相关基因的研究较少。目的:构建人大肠癌和癌旁组织的消减cDNA文库。方法:应用SSH技术分离大肠癌和癌旁正常组织差异表达基因的cDNA片段,将其与pGEM鄄TEasy载体连接,构建消减cDNA文库。将连接产物转化大肠杆菌DH5α进行文库扩增。随机挑取200个白色克隆,以聚合酶链反应(PCR)进行鉴定。结果:进行PCR扩增的200个克隆中,176个克隆有插入片段,片段分布于200～700bp。结论:成功构建了人大肠癌组织和癌旁组织差异表达基因的消减cDNA文库,为高通量筛选、克隆大肠癌特异性基因奠定了基础。

• 单位
  第一军医大学南方医院