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摘要
目的构建宫腔粘连动物模型, 并探讨低氧处理骨髓间充质干细胞(BMSC)及其来源的外泌体(BMSC-exo)对子宫内膜损伤的修复作用。方法在常规氧(21%O2)或低氧(1%O2)条件下培养从大鼠股骨中提取的BMSC及其BMSC-exo。采用刮宫+脂多糖宫腔内注射双重损伤的方法对40只健康雌性SD大鼠进行宫腔粘连建模, 并于建模第28天, 将40只模型大鼠采用随机数字表法随机分为5组(每组各8只), 并进行干预:(1)NC组:每侧宫腔注射0.2 ml磷酸盐缓冲液;(2)BMSC组:每侧宫腔注射0.2 ml浓度1×106/ml常规氧培养的BMSC;(3)L-BMSC组:每侧宫腔注射0.2 ml浓度1×106/ml低氧培养的BMSC;(4)BMSC-exo组:每侧宫腔注射0.2 ml浓度500 μg/ml常规氧培养的BMSC-exo;(5)L-BMSC-exo组:每侧宫腔注射0.2 ml浓度500 μg/ml低氧培养的BMSC-exo。分别于治疗第14、28天, 采用麻醉后颈椎脱臼法各处死每组大鼠4只, 取子宫内膜组织, 进行HE和Masson染色观察计算子宫内膜的腺体数量和纤维化情况, 蛋白印迹法(western blot)检测大鼠子宫内膜组织中血管生成相关细胞因子[血管内皮生长因子A(VEGFA)、CD31]和纤维化相关蛋白[胶原蛋白Ⅰ(collagen-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(collagen-Ⅲ)、平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)]的表达情况。结果 (1)HE和Masson染色结果显示, 治疗第14、28天, 与NC组相比, L-BMSC组、BMSC-exo组和L-BMSC-exo组宫腔粘连模型大鼠子宫内膜腺体数量均增加、子宫内膜纤维化面积均减少(P均<0.05), 且L-BMSC-exo组较BMSC-exo组变化显著(P均<0.05), BMSC-exo组较BMSC组变化显著(P均<0.05)。(2)western blot检测纤维化相关蛋白(collagen-Ⅰ、collagen-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1)表达结果显示, 治疗第14、28天时, 与NC组相比, BMSC组、L-BMSC组、BMSC-exo组和L-BMSC-exo组collagen-Ⅲ、TGF-β1的表达均降低(P均<0.05)。随着治疗时间的延长, 纤维化相关蛋白表达情况不同, 治疗第28天, 与BMSC组相比, BMSC-exo组和L-BMSC组collagen-Ⅲ、α-SMA和TGF-β1的表达均降低(P均<0.05);且L-BMSC-exo组collagen-Ⅲ和TGF-β1的表达均较BMSC-exo组更低(P均<0.05);L-BMSC-exo组collagen-Ⅰ、α-SMA和TGF-β1的表达均较L-BMSC组更低(P均<0.05)。(3)western blot检测血管生成相关细胞因子(VEGFA、CD31)表达的结果显示, 治疗第14、28天时, 与NC组相比, BMSC组、L-BMSC组、BMSC-exo组和L-BMSC-exo组VEGFA、CD31的表达均升高(P均<0.05)。治疗第28天, 与BMSC组相比, BMSC-exo组VEGFA和CD31的表达以及L-BMSC组CD31的表达均升高(P均<0.05);且L-BMSC-exo组VEGFA和CD31的表达均较BMSC-exo组和L-BMSC组更高(P均<0.05)。结论低氧处理的BMSC及其BMSC-exo均能促进宫腔粘连模型大鼠子宫内膜腺体增生, 抑制纤维化, 促进子宫内膜血管生成, 进一步修复受损的子宫内膜。低氧处理的BMSC-exo对宫腔粘连模型大鼠具有更好的治疗效果。
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