霍氏肠杆菌β-胡萝卜素9,10'双加氧酶的制备及其应用

作者：魏涛; 王敏; 张志平; 段乃心; 杨旭; 黄申; 毛多斌^*

来源：中国酿造, 2022, 41(01): 128-132.

• 霍氏肠杆菌
• 克隆表达
• β-紫罗兰酮
• β-胡萝卜素9,10’双加氧酶
• 酶学性质

以霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)法扩增β-胡萝卜素9,10’双加氧酶基因,构建重组质粒,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达,并采用高效液相色谱(HPLC)法检测9,10’双加氧酶活性。结果表明,通过镍柱亲和层析和分子筛Sephacryl TM S-200,得到纯化重组β-胡萝卜素9,10’双加氧酶,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,该酶分子质量约57 k Da,最适反应温度为40℃,最适反应p H值为8.5;当底物β-胡萝卜素质量浓度为500 mg/L,β-胡萝卜素9,10’双加氧酶酶活为0.4 U/m L时,β-紫罗兰酮产量为142.3 mg/L,产率达到79.4%。

• 单位
  郑州轻工业大学; 食品与生物工程学院