RKIP的克隆、表达及其影响肿瘤细胞迁移性质的初步研究

作者：皮亚洲; 华子春

来源：东南大学学报(医学版), 2014, 33(06): 752-755.

DOI：10.3969/j.issn.1671-6264.2014.06.016

• Raf激酶抑制蛋白
• 表达
• 纯化
• 细胞迁移

目的:研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)在细胞外对肿瘤细胞迁移的影响。方法:通过PCR扩增得到RKIP基因片段,使用Bam HⅠ和HindⅢ双酶切并回收,然后插入双酶切过的原核表达载体p ET28a(+),得到p ET28a-RKIP重组质粒。将重组质粒转化表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导表达,表达产物经Ni+金属螯合层析纯化得到His-RKIP重组蛋白。通过伤口愈合实验,观察不同浓度的重组RKIP在细胞外对肿瘤细胞迁移的影响。结果:重组RKIP获得了高效表达和分离纯化,伤口愈合实验表明,在低浓度重组RKIP作用下A549肿瘤细胞迁移速度增加,在高浓度下肿瘤细胞迁移速度降低。结论:重组RKIP在细胞外具有促进和抑制A549肿瘤细胞迁移的双重作用,具体表现为低浓度时促进A549肿瘤细胞迁移,高浓度时抑制A549肿瘤细胞迁移。

• 单位
  医药生物技术国家重点实验室; 南京大学