海南黑山羊MBL2基因的转录调控元件的筛选与分析

作者：王雪梅; 翟哲; 陈巧玲; 吴艳茹; 吴昊天; 黄惠娴; 刘志勇; 李崇瑞; 满初日嘎; 王凤阳; 杜丽; 陈思^*

来源：畜牧兽医学报, 2022, 53(06): 1795-1806.

DOI：10.11843/j.issn.0366-6964.2022.06.013

• 海南黑山羊
• MBL2基因
• 转录调控
• 双荧光素酶
• 核心启动子

甘露聚糖结合凝集素C(mannose binding lectin C,MBL-C)是C型(Ca2+依赖型)凝集素超家族的成员，其作为一种急性期蛋白，具有抗细菌感染的功能，参与机体的天然免疫反应。为鉴定出结合在MBL2基因启动子区(1 009 bp)的重要转录因子，探寻该基因的转录调控机制，本研究选取海南黑山羊MBL2基因的启动子序列1 009 bp,采用DNA重组技术克隆6个转录起始位点上游1 009 bp的启动子5′端侧翼缺失序列，克隆片段经双酶切后连接至pGL3-Basic载体。重组质粒转染至293T细胞中，结合双荧光素酶活性检测系统筛选MBL2基因的核心启动子区域。通过在线生物信息学软件预测山羊MBL2基因的核心启动子区域的转录因子结合位点，利用点突变技术构建转录因子结合位点缺失的载体，转染293T细胞后结合双荧光素酶活性检测系统分析其转录活性。结果表明，海南黑山羊MBL2基因的核心启动子区域位于转录起始位点上游-304～-45 bp范围内，在线软件分析该区域存在RELA、NF-κB2、MZF1等3种转录因子结合位点。双荧光素酶报告分析结果表明，RELA和NF-κB2的结合位点缺失后均使山羊MBL2基因的转录活性极显著下降(P<0.01)。结果提示，RELA和NF-κB2对山羊MBL2基因的转录活性可能具有重要的正调控作用。该研究为进一步探寻海南黑山羊MBL2基因的功能提供理论依据。

• 单位
  动物科技学院; 海南大学