紫杉醇合成关键酶BAPT基因的克隆及原核表达

作者：张志建; 郭佳玉; 张鹏; 徐盼盼; 刘博; 张燏; 付春华; 余龙江

来源：现代生物医学进展, 2010, 10(16): 3011-3014.

• 曼地亚红豆杉
• 紫杉醇
• 3-氨基-3-苯基丙酰转移酶基因
• 原核表达

目的:克隆曼地亚红豆杉紫杉醇生物合成途径中的关键酶3-氨基-3-苯基丙酰转移酶(3-amino-3-phenylpropanoyltrans-ferase,BAPT)基因,并在大肠杆菌中表达。方法:首先提取曼地亚红豆杉细胞的总RNA,反转录获得其sscDNA,并以其为模板扩增BAPT酶的基因,然后将其与原核表达载体pET32a(+)连接,构建重组质粒pET32a(+)-BAPT,并将重组质粒转入E.coliBL21宿主中诱导表达。结果:扩增获得1338bp的BAPT基因序列,成功构建了原核表达质粒pET32a(+)-BAPT,并在E.coliBL21中实现高效表达。结论:BAPT基因表达产物的分子量约为51kDa,与预期大小一致。该研究为进一步分析曼地亚红豆杉BAPT酶的酶学特性奠定了基础。

• 单位
  华中科技大学