GLDC通过PI3K/Akt/mTOR通路调控卵巢癌细胞的增殖与凋亡

作者：李哲丰; 李洁; 赵晓婷; 岳文涛^*

来源：国际肿瘤学杂志, 2021, 48(12): 716-722.

DOI：10.3760/cma.j.cn371439-20210514-00142

• 卵巢肿瘤
• 细胞增殖
• 细胞运动
• 细胞凋亡
• 甘氨酸脱氢酶

目的探究甘氨酸脱氢酶(GLDC)基因通过PI3K/Akt/mTOR调控卵巢癌细胞增殖与凋亡的机制。方法采用RNA干扰技术沉默卵巢癌HEY、SK-OV-3细胞中GLDC的表达, 分别将细胞分为si-control组、si-GLDC#1组和si-GLDC#2组, si-control组为转染siRNA-control的细胞, si-GLDC#1组为转染siRNA-GLDC#1的细胞, si-GLDC#2组为转染siRNA-GLDC#2的细胞。采用蛋白质印迹法检测GLDC蛋白表达水平以及PI3K/Akt/mTOR蛋白磷酸化水平, 分别采用CCK-8法、Transwell小室迁移实验、细胞划痕实验和流式细胞仪检测细胞增殖、迁移和凋亡能力。结果 GLDC在卵巢癌HEY细胞si-control组、si-GLDC#1组和si-GLDC#2组中的相对表达量分别为1.00±0.01、0.68±0.10、0.80±0.08, 差异有统计学意义(F=13.80, P=0.006);GLDC在卵巢癌SK-OV-3细胞si-control组、si-GLDC#1组、si-GLDC#2组中的相对表达量分别为1.02±0.01、0.58±0.17、0.60±0.25, 差异具有统计学意义(F=6.08, P=0.036)。si-control组、si-GLDC#1组和si-GLDC#2组3组HEY细胞培养24 h后吸光度(A)值分别为1.04±0.03、0.91±0.02、0.82±0.01, 48 h后分别为1.53±0.13、1.30±0.03、1.29±0.07, 72 h后分别为1.44±0.08、1.25±0.01、1.15±0.03, 差异均具有统计学意义(F=83.14, P<0.001;F=8.96, P=0.007;F=29.55, P<0.001), 进一步两两比较, 24、48、72 h si-GLDC#1组、si-GLDC#2组细胞增殖活力均低于si-control组, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。在HEY细胞中, si-control组、si-GLDC#1组、si-GLDC#2组迁移细胞数目分别为57.33±6.43、27.67±5.13、30.67±2.31, 差异具有统计学意义(F=32.88, P=0.001);si-GLDC#1组、si-GLDC#2组迁移细胞数较si-control组显著下降, 差异均有统计学意义(P<0.001;P=0.001);在SK-OV-3细胞中也观察到类似结果。在SK-OV-3细胞中, si-control组、si-GLDC#1组、si-GLDC#2组的划痕愈合率分别为(51.27±1.59)%、(26.35±2.94)%、(26.34±7.69)%, 差异具有统计学意义(F=26.54, P=0.001);si-GLDC#1组、si-GLDC#2组细胞划痕愈合率较si-control组显著下降, 差异均有统计学意义(均P=0.001)。在HEY细胞中, si-control组、si-GLDC#1组、si-GLDC#2组细胞凋亡率分别为(7.11±0.82)%、(10.44±1.50)%、(17.39±1.55)%, 差异具有统计学意义(F=46.52, P<0.001);si-GLDC#1组、si-GLDC#2组细胞凋亡率较si-control组均显著上升, 差异均有统计学意义(P=0.022;P<0.001);在SK-OV-3细胞中也观察到类似结果。在HEY细胞中, si-control组、si-GLDC#1组、si-GLDC#2组中PI3K总蛋白差异无统计学意义(F=0.54, P=0.631), 但pAkt/Akt、pmTOR/mTOR水平差异具有统计学意义(F=22.14, P=0.016;F=10.57, P=0.044);其中si-GLDC#1组、si-GLDC#2组较si-control组pAkt/Akt、pmTOR/mTOR均显著降低(P=0.015, P=0.008;P=0.039, P=0.023);在SK-OV-3细胞中也观察到类似结果。结论在卵巢癌细胞中, 沉默GLDC可通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。

• 单位
  中心实验室; 首都医科大学附属北京妇产医院