鸡ANP32家族蛋白亚细胞定位及其在免疫器官中的表达特征分析

作者：邢静如; 石海英; 王燕碧; 赵采芹; 唐宏; 段志强^*

来源：南方农业学报, 2022, 53(11): 3249-3256.

• 鸡
• ANP32家族蛋白
• 亚细胞定位
• 免疫器官
• 组织表达特征

【目的】明确鸡ANP32家族蛋白的亚细胞定位及在不同月龄鸡免疫器官中的表达特征，为后续研究鸡ANP32家族蛋白与新城疫病毒（NDV）复制及其致病性的关系打下基础。【方法】分别构建鸡ANP32家族基因重组真核表达载体，转染HEK-293T细胞后进行诱导表达，利用Western blotting检测融合蛋白表达情况，并通过荧光观察分析融合蛋白亚细胞定位；同时采用实时荧光定量PCR检测ANP32家族基因在1～6月龄鸡免疫器官（脾脏、胸腺和法氏囊）中的表达水平。【结果】成功构建了鸡ANP32家族基因重组真核表达载体pEGFP-C1-ANP32A、pEGFP-C1-ANP32B和pEGFP-C1-ANP32E，转染HEK-293T细胞后得到正确表达，获得携带EGFP标签的融合蛋白EGFP-ANP32A、EGFPANP32B和EGFP-ANP32E，其分子量分别为60.0、57.9和56.9 k D。亚细胞定位分析结果表明，融合蛋白EGFP-ANP32A、EGFP-ANP32B和EGFP-ANP32E的荧光与细胞核荧光完全重合，即主要定位在细胞核。实时荧光定量PCR检测结果表明，ANP32家族基因在1～6月龄鸡免疫器官（脾脏、胸腺和法氏囊）中均有表达，且在不同免疫器官中的表达水平存在差异；ANP32A和ANP32E基因在1～6月龄鸡免疫器官中呈先上升后下降的表达趋势，且在2月龄免疫器官中的相对表达量达峰值；ANP32B基因的表达则呈下降趋势，以1月龄鸡免疫器官中的相对表达量最高。【结论】鸡ANP32家族蛋白主要定位于细胞核，且ANP32家族基因在不同月龄鸡免疫器官中均有表达，但这3个基因具有独特的表达特征，其表达差异与免疫器官发育及免疫功能间的关系有待进一步探究。

• 单位
  动物科学学院; 贵州大学