绵羊Pax7基因慢病毒示踪载体的构建与表达检测

作者：孙多临; 冯汉卿; 赵恒; 陈胜男; 李松美; 王春生^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2020, (19): 11-165.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.12.0060

• 绵羊
• Pax7基因
• 慢病毒载体
• 载体构建
• 表达检测

为了探讨是否可以利用Pax7基因诱导绵羊间充质细胞为成肌细胞,试验采用RT-PCR技术从绵羊肌肉中成功克隆Pax7基因的编码区序列(CDS)后,将其连接到酶切后的空表达载体pTetOn3-DsRed上,构建诱导型慢病毒示踪载体pTetOn3-DsRed-Pax7。通过脂质体法将诱导型慢病毒示踪载体pTetOn3-DsRed-Pax7与辅助包装载体VSV-G、px和pMD共转染到293T细胞中,获得病毒上清液后侵染293T细胞,利用Western-blot技术检测侵染后细胞中Pax7基因的表达情况,验证所构建载体的有效性及Pax7基因的表达活性。结果表明:试验成功克隆得到绵羊Pax7基因的CDS及构建出诱导型慢病毒示踪载体pTetOn3-DsRed-Pax7;病毒侵染后,靶细胞经绿光(532 nm)照射可表达红色荧光;与空白对照细胞中Pax7基因的表达量相比,侵染诱导型慢病毒示踪载体pTetOn3-DsRed-Pax7的293T细胞中Pax7基因的表达量明显上升,且加入诱导物强力霉素后Pax7基因表达量显著高于未添加强力霉素的细胞。说明试验已成功构建出特异性表达绵羊Pax7基因的诱导型慢病毒示踪载体pTetOn3-DsRed-Pax7。

• 单位
  东北林业大学; 生命科学学院