RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中的表达定位

作者：张峥嵘; 郑幽; 阮班展; 王嫚娜; 梁剑青; 李世崇; 黄红艳; 闫敏; 陈昭烈; 刘真真; 孙强

来源：生物技术通讯, 2017, 28(05): 639-642.

• Ras相关GTP结合蛋白D(RRAGD)
• 基因克隆
• cell-in-cell

目的:构建RRAGD-EGFP融合基因表达载体pQCXIP-RRAGD-EGFP,并检测RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中的表达定位。方法:提取HEK293细胞总RNA,逆转录得到cDNA并扩增RRAGD基因,克隆入逆转录载体pQCXIP-EGFP-N1,病毒包装后感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-436,活细胞观察其在细胞内的表达定位。结果:构建获得逆转录病毒载体pQCXIP-RRAGD-EGFP,融合蛋白RRAGD-EGFP定位于胞浆囊泡和细胞核。结论:RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中表达定位于胞浆囊泡,与其参与溶酶体调节功能一致,为后续分析RRAGD在cell-in-cell中的作用奠定了基础。

• 单位
  首都医科大学附属北京世纪坛医院; 军事医学科学院; 郑州大学