皱纹盘鲍肽聚糖识别蛋白的表达特性

作者:乔琨; 郑春花; 陈贝; 苏永昌; 郝华; 许旻; 蔡水淋; 刘智禹*
来源:大连海洋大学学报, 2023, 1-14.
DOI:10.16535/j.cnki.dlhyxb.2023-111

摘要

为研究皱纹盘鲍肽聚糖识别蛋白HdhPGRP-SC2-like的免疫功能特性,利用RACE技术克隆了HdhPGRP-SC2-like基因的全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR(qPCR)分析了HdhPGRP-SC2-like基因在皱纹盘鲍的组织分布,通过原核表达获得了重组蛋白rHdhPGRP-SC2-like,并验证其酰胺酶活性及免疫特性。结果表明:HdhPGRP-SC2-like基因的cDNA全长为938 bp,开放阅读框为780 bp,编码260个氨基酸,包含保守的PGRP结构域和Ami_2结构域;HdhPGRP-SC2-like属于短型PGRP,与软体动物近缘物种PGRP具有高度相似性;qPCR分析显示,HdhPGRP-SC2-like mRNA表达于皱纹盘鲍各组织中,在鳃中表达量最高、外套膜与消化腺中均有一定量的表达,腹足和血细胞中含量最低;进一步构建了原核表达载体pET-28a(+)-HdhPGRP-SC2-like,经诱导表达、分离纯化获得重组蛋白rHdhPGRP-SC2-like,该蛋白具有肽聚糖结合活性,并且在Zn2+存在的情况下显示出酰胺酶活性。研究表明,HdhPGRP-SC2-like结合细菌肽聚糖成分,在机体抵御入侵细菌等免疫防御中起重要作用。

全文