人高迁移率族B1蛋白原核表达、纯化及抗体制备和初步应用

作者：田爽; 刘民; 李欣; 浦永; 吴海东; 汤华

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2008, (11): 1110-1112.

• HMGB1
• 原核表达
• 抗体
• 癌症

目的:原核表达并纯化人高迁移率族B1蛋白(HMGB1)免疫日本大耳白兔制备其抗体。方法:构建原核表达质粒pRsetA2-HMGB1,转化大肠杆菌BL21(DE3),HMGB1蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。融合蛋白通过Ni2+-NTA树脂亲和纯化后免疫兔子制备抗体血清。以间接ELISA法检测抗体效价,Western blot和免疫荧光染色鉴定抗体特异性。结果:成功构建原核表达质粒,表达并纯化HMGB1蛋白。ELISA检测抗体效价为1∶16000以上,Western blot和免疫荧光染色确定抗体具有高度特异性。结论:HMGB1蛋白和抗体的成功制备,为下一步研究将HMGB1作为肿瘤等疾病治疗的新靶点奠定基础。

• 单位
  基础医学院; 天津医科大学; 中心实验室