摘要
目的 研究白细胞介素17(IL-17)促进PC9细胞表达程序性死亡配体1(PD-L1)的分子调控机制。方法 用IL-17 50μg·L-1刺激PC9细胞0(细胞对照),1,2,3,6和12 h,用RT-PCR和Western印迹法分别检测PC9细胞中MEF2C和PD-L1 mRNA和蛋白表达。构建pIRES2-MEF2C及其对照质粒pIRES2-EGFP和shMEF2C及其对照质粒shCTR,分别转染PC9细胞48 h(shRNA质粒转染后加IL-17刺激3 h),即分pIRES2-EGFP和pIRES2-MEF2C组或shCTR,shCTR+IL-17和shMEF2C-4+IL-17组,同上检测MEF2C和PD-L1 mRNA和蛋白表达。另构建PD-L1启动子全长(pGL3-PD-L1-FL)和不同截短的pGL3-PD-L1-1~4质粒。先将pGL3-PD-L1-FL与pIRES2-MEF2C共转染PC9细胞48 h或与shMEF2C-4共转染48 h加IL-17刺激3 h,用荧光素酶报告基因实验测定PD-L1-FL启动子活性(分组同上)。此外,将对照pGL3-basic和pGL3-PD-L1-FL及pGL3-PD-L1-1~4截断启动子质粒分别转染PC9细胞48 h再加IL-17刺激3 h或与pIRES2-MEF2C共转染PC9细胞后再测PD-L1启动子活性。结果 与细胞对照组相比,IL-17刺激2 h,MEF2C和PD-L1 mRNA和蛋白表达已上调(P<0.05),3 h达到高峰(P<0.01)。与pIRES2-EGFP组相比,pIRES2-MEF2C组PD-L1 mRNA(P<0.05)和蛋白表达(P<0.01)及启动子活性(P<0.05)明显升高;与shCTR组相比,shCTR+IL-17组上述指标均显著升高(P<0.05,P<0.01),但shMEF2C-4+IL-17组则明显低于shCTR+IL-17组(P<0.01)。此外,与pGL3-basic组比,IL-17刺激或过表达MEF2C可增加pGL3-PD-L1-FL,pGL3-PD-L1-1,pGL3-PD-L1-2或pGL3-PD-L1-3的启动子活性(P<0.01,P<0.05),但pGL3-PD-L1-3和pGL3-PD-L1-4的启动子活性则显著低于pGL3-PD-L1-FL组(P<0.05,P<0.01),提示PD-L1启动子这2个区域含有MEF2C的结合部位。结论 IL-17刺激PC9细胞上调的MEF2C可促进PD-L1表达,其机制可能与MEF2C结合了PD-L1启动子的相应部位有关。
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单位南京医科大学第一附属医院; 南京医科大学