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摘要
目的 基于免疫球蛋白结合结构域ZZ domain和过氧化物酶APEX2的融合表达，开发一种可以特异性结合免疫球蛋白且具有过氧化氢酶催化活性的新型免疫亲和检测试剂。方法 将ZZ domain和APEX2融合表达蛋白——ZZ-APEX2在BL21(DE3)大肠杆菌进行大量表达，并利用IBA公司的strep-Tactin纯化系统进行纯化。通过点印迹和Western blotting检测ZZ-APEX2催化过氧化氢分解并启动鲁米诺发光反应的能力。通过愈创木酚比色法测定ZZ-APEX2的过氧化氢酶活性。结果ZZ-APEX2可以在大肠杆菌中可溶性表达，而且可以通过strep-Tactin系统纯化获取。ZZ-APEX2在室温保存48 h和在-20℃保存2个月均保持着稳定的过氧化氢酶活性，并可以用于Western blotting实验。通过双倒数法作图发现，与常规羊抗兔IgG-HRP和羊抗鼠IgG-HRP二抗相比，ZZ-APEX2具有更大的Kcat(s-1)值。结论 成功开发了一种分子量小、特异性好、容易大量生产、无需实验动物和繁琐的HRP蛋白提纯步骤的新型免疫亲和检测试剂。
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